Page 75 - 动物生物技术与繁殖研究
P. 75
第二章 病毒性动物疫病防控
3. 酶联免疫吸附试验
酶联免疫吸附试验（ELISA）的原理是将抗体或抗原吸附在固相载体表面，
检测样品中的抗原或抗体可与其特异性结合，形成抗原抗体复合物，将酶标抗体
再与该复合物结合，根据加入底物的颜色反应即可判定结果。随着该技术不断发
展与应用，其检测结果也更加准确而有效，具有方便、快速、设备仪器要求低、
成本低等优点。但是与红细胞吸附实验相比，其灵敏性和特异性较低，检测结果
受样本影响较大；与 PCR 相比，其特异性和灵敏性低，易出现假阳性；样本易
受保存环境温度影响，检测结果准确性不能得到保证。
4. 荧光抗体试验
荧光抗体试验（FAT）是对病猪冰冻切片或者组织切片进行抗原检测。检测时，
将病猪的冰冻切片、组织切片或已在载玻片上涂有已接种白细胞培养物的细胞沉
淀干燥后，浸入丙酮中进行固定，用异硫氰酸荧光素标记抗非洲猪瘟病毒抗体，
再用 PBS 液冲洗后，在荧光显微镜观察，如果胞浆中发现特异性荧光，判为阳性。
该实验具有很强的敏感性和特异性，可快速、简便地得到非洲猪瘟病毒检测的结
果。但实验对荧光素特异性要求较高，非特异性荧光素染色可能会造成假阳性的
结果，对急性非洲猪瘟的灵敏度高。同时该实验对操作人员的要求较高，并且需
要借助显微镜，难以实现现场检测，常作为检测非洲猪瘟病毒的辅助方法。
5. 聚合酶链式反应
聚合酶链式反应（PCR），具有敏感、快速、特异性高的特点，同时对样品
的纯度、血液样品及组织的保存方式要求较低，被广泛应用于非洲猪瘟病毒的
检测。Agüero 等根据 p72 保守基因序列，设计引物，建立了快速检测 ASFV 的
PCR 方法，且该方法得到 OIE 认证。但 2015 年有相关研究认为，该方法在检测
中会出现假阴性结果。为解决这个问题，Luo 等根据 p72 基因设计引物，检测不
同地区 4 个基因型的 14 个代表毒株，表明该方法更为灵敏、准确，能相对全面
地检测非洲猪瘟病毒。
6. 多重 PCR
此技术是在 PCR 技术的基础上建立并发展起来的，能在同一个反应体系中，
同时加入多对引物，分别扩增到不同的靶标，获得相应目的片段。还能对 DNA
和 RNA 病毒进行同时检测，效率较高，降低了试剂耗材成本。如五重 RT-PCR
鉴别诊断方法，广泛应用于动物疫病的检测。
61
