Page 77 - 动物生物技术与繁殖研究

第二章 病毒性动物疫病防控

复合物，胶体金聚集于检测线显色，通过观察显色反应，即可判定结果。该技术
可通过目测法判断结果，不需要专业的仪器设备，具有操作简单，特异性、灵敏
度高等特点，适合现场、基层、大规模排查或是生猪调运临场的使用。张鑫宇等

于 2014 年以非洲猪瘟 p54 的重组蛋白为核心蛋白标记胶体金，再分别用葡萄球
菌 A 蛋白和抗 p54 多抗作为检测线和质控线，按一定顺序制备非洲猪瘟 p54 抗
体胶体金试纸，建立了 p54 抗体胶体金检测法，该试纸与猪的其他病毒抗体阳性
血清无交叉反应，表明该检测法的敏感性和特异性高。

3. 间接免疫荧光试验
间接免疫荧光试验是利用特异性抗体和样品中相应抗原反应，形成抗原抗
体复合物，再用荧光标记的第二抗体与抗原抗体复合物结合，洗涤后在荧光显
微镜下观察荧光。该试验敏感度高，但对试验条件及操作要求较高，常用于复核

ELISA 检测中的可疑样品。
（三）纳米抗体在检测中的应用
纳米抗体（Nanobody，Nb）作为抗体的新成员，近年来在医药检测和治疗
领域的发展较为迅速。Nb 较传统的单克隆抗体有着更加优越的应用前景，可以

克服传统单克隆抗体制备成本高、工艺复杂，以及难以人工改造等缺点。
1. 纳米抗体的结构特征
传统的 IgG 由两条相同的重链和两条相同的轻链构成，重链间、重链与
轻链间通过二硫键连接，重链和轻链由可变区和恒定区组成，相对分子量约为

150kDa。纳米抗体是在骆驼、羊驼和鲨鱼体内发现的一种结构特别的抗体，与传
统 IgG 相比，Nb 体积小，呈椭圆形，通常包括骨架区和互补决定区，为凸型结构，
利于与抗原结合。故 Nb 特异亲和力更高。单链抗体缺少轻链和重链 CH1，只含
有重链 CH2、CH3 和可变区。抗原结合部分仅由重链可变区构成，尺寸约是传

统抗体的 1/10。Nb 主要依靠 3 个互补决定区（CDR1、CDR2、CDR3）与抗原分
子结合，其氨基酸序列突变性较强。高变区之间骨架区的氨基酸序列变化较小。
2. 纳米抗体的生物学特性
Nb 结构简单、体形小，相对分子量约为 15kDa，较小的分子量和体积使其

具有较好的组织穿透力。Nb 溶解度高，在于 Nb 骨架区 FR2 中的疏水氨基酸残
基突变为亲水氨基酸残基，因而增加了 Nb 的溶解性。Nb 稳定性强、易于保存，
对极端条件具有一定的抵抗力。Nb 在 37℃下可保存 1 周，在 -80℃低温下可长

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