Page 125 - 动物生物技术与繁殖研究
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第五章 动物生物技术应用
NANOG 和 OCT4 启动子区域 DNA 甲基化水平更低。
正常发育的卵母细胞质包含一切重启胚胎发育的重编程因子，用卵母细胞质
在核移植前处理供体细胞，提前诱导供体细胞启动重编程，从而减轻受体卵母细
胞的重编程压力，也可能是一种新的思路。Yang 等用非洲爪蟾卵抽提物处理猪
克隆供体细胞，降低了供体细胞整体甲基化水平，提高了猪克隆胚胎体外发育能
力。Bui 等用猪生发泡期卵母细胞抽提物处理供体细胞，结果发现供体细胞获得
了部分多能干细胞特性，克隆囊胚在表观修饰水平（H3K9 甲基化和乙酰化）及
多能基因（OCT4 和 NANOG）表达上更加类似于 IVF 囊胚，囊胚质量显著提高。
为了验证外源表达 OCT4 的供体细胞系是否有利于提高体细胞克隆重编程效率，
Goissis 等构建了一个表达 OCT4 的供体成纤维细胞系，结果发现，供体细胞中
OCT4 转录因子的提前激活显著提高了克隆胚胎中 CDX 基因（一种滋养层细胞
标记基因）阳性细胞的比例，有利于克隆胚胎的分化。Kim 等也发现供体细胞中
OCT4 的强制表达提高了克隆胚胎体外发育速度和囊胚率。
上述提前诱导供体细胞重编程的方法均在一定程度上提高了克隆胚胎的发育
潜能。然而重编程程度更高的诱导多能干细胞（Induced Pluripotent Stem Cells，
iPSC）作为供体并没有表现出预期的优势，Fan 等首次得到了以 iPS 细胞为核移
植供体的克隆猪，但克隆猪的得率依然不高，且需要在克隆胚胎培养基中添加
Scriptaid 加以辅助。利用 iPSCs 作为克隆供体低于预期的效果，有可能是 iPSCs
供体细胞体外培养时间过长，或是 iPscs 多余的重编程反而扰乱了卵母细胞指导
的重编程节奏。
（六）基于单基因的靶向遗传调控提高克隆效率
Inoue 等敲除活性 X 染色体上 XJST 基因，使得小鼠体细胞克隆效率提高
8~10 倍，随后该研究团队通过 RNAi 干扰的方法抑制桑椹胚前克隆胚胎中异常表
达的 XIST 基因，显著提高了小鼠克隆胚胎的全程发育效率。Zeng 等发现向重构
胚中注射 anti—Xist siRNA 可以抑制 16 细胞前雄性克隆胚胎中 XJST 基因的表达，
显著提高了猪克隆囊胚的细胞总数和出生健仔数。对 SCNT 特异的重组抵抗区域
（Reprogramming-resistant Regions，RRRs）和 H3K9me3 等抑制性组蛋白修饰的
相关性研究发现，利用靶向调节 H3K9me3 表达水平以提高体细胞克隆效率的构
想在小鼠、人、牛及最近公布的克隆猴上均得到证实，通过向小鼠和人克隆胚胎
注射 H3K9me3 去甲基化酶 Kdm4d 或 Kdm4a 基因 mRNA，显著提高了克隆胚胎
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