Page 123 - 动物生物技术与繁殖研究

第五章 动物生物技术应用

异常的 H19 基因印迹甲基化模式；改变了克隆胚胎 Xist 基因 DNA 甲基化重编程
和转录激活与失活的动态模式。
综上，DNMTi 和 HDACi 两种表观修饰药物在促进包括小鼠、猪和牛等哺乳
动物体细胞核重编程和克隆效率方面均表现出了一定的积极效果，尤其是 TSA

在提高人和小鼠克隆重编程方面表现出了一定的保守性，然而，这种保守性并不
能完全拓展到所有的哺乳动物们，仍然存在一定的物种差异，因此，有必要进一
步从全基因组水平研究这些小分子修饰剂对体细胞克隆胚胎保守或特异的作用

机制。
（二）利用蛋白酶体抑制剂提高克隆效率
核移植过程中，供体细胞和受体卵母细胞融合、激活后，卵母细胞成熟促进
因子（Maturation Promoting Factor，MPF）活性显著下降，对供体细胞核重编程

及随后的胚胎发育产生不利的影响。最近，利用蛋白酶体抑制剂（MGl32）抑制
蛋白酶体对 cyclinB（MPF 的一种亚基）的降解以维持 MPF 的活性，被认为是
一种提高哺乳动物胚胎发育效率的途径。Whitworth 等同时在重构胚融合和激活
时添加 MGl32，显著提高了克隆猪的妊娠发育率。对于老化或需要延长的体外

成熟培养的卵母细胞，用 MGl32 抑制成熟前卵母细胞中 MPF 的降解，也显著提
高了猪克隆胚胎体外发育性能和 PCNA 等基因的转录水平。Shen 等研究发现，
MGl32 通过促进新生克隆胚胎基因组激活和调节组蛋白乙酰化相关基因的表达显
著提高了猪体细胞克隆胚胎的发育能力。

（三）利用抗应激药物提高克隆效率
体细胞克隆包括卵巢采集、体外成熟培养、去核、注核、电融合、激活及
胚胎的体外培养等诸多体外操作，克隆胚胎容易遭受应激及其诱导的细胞凋亡。
Canepa 等研究发现，相对于体外受精胚胎和体内产生胚胎，牛克隆胚胎中内质

网（ER）应激相关基因表达显著上调，表明克隆胚胎存在 ER 应激。Zhang 等研
究发现，ER 应激因子 XBPl 在猪生发泡卵母细胞、桑椹期和囊胚阶段胚胎中表
达水平很高，且 ER 应激药物 TUDCA（taurour-sodeoxycholate）可以抑制 ER 介
导的细胞凋亡，进而促进卵母细胞的成熟，提高了胚胎发育性能。Xu 等比较了

猪体细胞克隆囊胚和体外受精囊胚的转录谱，发现 ER 通路差异显著，表明体细
胞克隆胚胎存在一定 ER 应激。因此，筛选各种体外操作或环境特异的应激响应
或标记蛋白或转录因子，并在此基础上改进新的核移植操作方法和优化体外培养

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