Page 103 - 动物生物技术与繁殖研究

第四章 动物寄生虫病防控

测纸条，检测 176 份猪血清的结果与 Gold-ELISA 方法比较具有较高的一致性。
目前，免疫层析技术因具有快速、操作简便、结果易判和不需特定仪器等优点，
得到了广泛的应用。但是当前市场中试纸条的产品质量良莠不齐，存在特异性不

高、假阳 / 阴性等现象。
5. 酶联免疫吸附试验（Enzyme-linked Immunosorbent Assay，ELISA）
ELISA 方法利用酶的高效催化作用及底物放大反应效果，使检测灵敏度大大
提高，提高了特异性抗原和抗体在免疫反应过程中的敏感性，既可用于检测抗原

也可以检测抗体。目前，国内外已研制出很多反应灵敏、特异性高、重复性好的
动物弓形虫 ELISA 检测试剂盒，主要检测循环抗原（CAg）和特异性抗体（IgM
和 IgG），适于大批量血清样品的检测，是血清学方法中一种方便且安全的方
法。常用的包括间接 ELISA、斑点 ELISA（Dot-ELISA）、亲和素－生物素复合

ELISA（ABC-ELISA）及双抗夹心 ELISA（DS-ELISA）等。如 Zhuo X 等以弓
形虫 rMAG1 为包被抗原建立的间接 ELISA 检测方法，对 93 份狗血清进行检测，
结果显示其特异性和敏感性均高于以 TLA 为包被抗原建立的间接 ELISA 方法。
宫枫举等建立了检测弓形虫循环抗原的夹心 ABC-ELISA 方法，检测 68 份猪临

床血样与 Nest-PCR 结果一致，表明该方法特异性强、敏感性高，可用于弓形虫
急性感染的早期或活动期的诊断。寇金华用制备的抗弓形虫重组蛋白 SAG3 单克
隆抗体建立猪弓形虫双抗夹心 ELISA 法，并对广东、吉林地区各 94 份猪血清样
品进行检测，阳性率分别为 20.2% 和 11.7%，与建立的胶体金试纸条做对比，两

者符合率分别为 90.90% 和 89.47%。ELISA 及其衍生的一系列血清学方法具有可
重复、易自动化和标准化等特点，还能用于定性和定量检测，是目前应用最广的
动物弓形虫检测方法。
（三）分子生物学检测

1. 聚合酶链式反应（Polymerase Chain Reaction，PCR）
PCR 技术可在较短时间内扩增弓形虫基因组的特定片段，产生数百万个拷
贝的靶 DNA 分子，与其他衍生出的检测方法，如巢氏 PCR、多重 PCR 和 PCR-
RFLP 等方法一样，都能通过多次扩增基因片段而提升检测的敏感性和特异性。

常用的引物靶基因有 B1 基因、529bp 重复序列、18SrDNA、核糖体内转录间隔
区（ITS）和 SAG1（P30）基因等，这些基因在所有弓形虫株中均为高度保守。
Liu X C 等基于弓形虫 ITS-1 基因构建 PCR 法，对鸡场进行检测，结果显示 2%

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