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动物生物技术与繁殖研究
Research on Animal Biotechnology and Reproduction

的散养鸡场为弓形虫阳性，而规模养殖场未发现弓形虫。Nabi H 等的研究表明，
与显微镜法相比，PCR 是检测猫弓形虫粪便卵囊的更可靠方法。Cong W 等以半
巢式 PCR 检测弓形虫 B1 基因和 PCR － RFLP 方法对我国山东省 618 份驴肌肉

样本进行检测，并首次从驴体内分离出弓形虫 ToxoDB#1 基因型。Lukasova R 等
对 2014—2015 年期间来自南非 110 份野生鸟和 15 份家养鸟的脑组织样本进行调
查，通过 PCR 方法确定 2.7% 的野生鸟存在弓形虫感染，且采用多重 PCR 对阳
性样品进行基因分型分析，结果确定红眼鸽感染的弓形虫为Ⅱ型。随着技术体系

的不断完善和发展，PCR 及相关衍生技术因快速、灵敏、简便和可靠等特点被广
泛应用。
2. 实时定量 PCR（Quantitative Real-time PCR，qPCR）
qPCR 是将探针技术和 PCR 技术相结合，每个循环中通过探针和嵌合染料检

测到扩增产物，利用标准已知浓度进行定量，又称荧光定量 PCR。该方法具有
较高的特异性和敏感性，可用于评估动物弓形虫的感染强度及治疗效果。Sroka
J 等检测 60 份羊奶样品，阳性率为 65%，而巢式 PCR 仅为 43%。Camilo L M 等
利用 B1 和 REP-529 引物对 807 个巴西患者临床样品进行 RT-PCR 测定，结果显

示 REP-529 引物组优于 B1 组。由于 qPCR 是一个单管封闭系统，相比常规 PCR
和巢式 PCR 等具有灵敏度高和假阳性较少等优势已被广泛应用。
3. 环介导等温扩增（Loop-mediated Isothermal Amplification，LAMP）
LAMP 是在 BstDNA 聚合酶参与下用 4 对引物识别弓形虫靶基因的 6 个区域，

在等温条件下使靶基因高效扩增，产物可通过荧光定量、电泳检测，也可通过浊
度计或者离心后肉眼观察沉淀的方法。Lass A 等通过 RT-PCR 和靶向 B1 基因的
LAMP 方法分析弓形虫病的起源可能追溯到空气。Lalle M 等以 529bp 重复序列
为靶向的 LAMP 检测到每 50g 即食生菜中弓形虫卵囊为 25 个。由于 LAMP 检测

时仅需水浴或普通加热装置，能直接观察到扩增产物，在没有精密仪器条件下是
一种快捷、简便、敏感的诊断方法，其灵敏度和扩增效率远高于常规 PCR。

三、动物弓形虫病疫苗应用

（一）传统方式研制的灭活疫苗及弱毒活疫苗
1. 灭活疫苗
灭活疫苗是由强毒虫株经灭活剂灭活后制备的疫苗，虽然灭活疫苗保留了虫

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