Page 156 - 动物生物技术与繁殖研究

动物生物技术与繁殖研究
Research on Animal Biotechnology and Reproduction

SCNT 技术成功克隆出 RAG1/2 双敲猪，这种仔猪主要表现为免疫器官发育不良，
成熟的 B、T 淋巴细胞大量减少而且淋巴细胞 V（D）J 基因片段重排消失，是明
显的 SCID 特征。2016 年，Suzuki 等用基因靶向成纤维细胞核移植的方法制备出

了IL2RG和RAG2双基因敲除猪，表现为混合表型更严重的IL2RG或RAG2消融，
与 IL2RG 和 RAG2 单基因敲除猪相比，前者可作为异种移植研究的良好平台。
（二）获得性免疫缺陷综合征基因编辑动物模型
获得性免疫缺陷综合征（Acqired Immre Deficiency Syndrome，AIDS）病毒

是一种逆转录 RNA 病毒，被定名为人类免疫缺陷病毒（HIV），主要攻击并大
量破坏人体免疫系统中最重要的 CD4+T 淋巴细胞，使得机体细胞免疫功能显
著降低，最终导致机体感染病原体的机会增加或产生恶性肿瘤而死亡。ZFN、
CRISPR/Cas9 等基因编辑技术可能从多个 HIV 储存库中清除或破坏 HIV 整合基

因组或 HIV 感染细胞，这为将来完全治愈 AIDS 提供了技术支持。
Karpinski 等使用 SILPE 进化出一种新的重组酶（Brec1），该重组酶位点
能特异性地识别长末端重复序列（LTRs）中存在的 34bp 序列，有效而精确地去
除整合的 HIV-1 原病毒，并被发现对许多临床 HIV-1 分离物及用病人来源的细

胞培养的小鼠都有效。Holt 等设计以 17% 的频率破坏人 CD34+ 造血干 / 祖细胞
中的 CCR5（HIV-1 感染所需的受体），用 ZFN 处理细胞移植免疫缺陷小鼠，
产生了稳定破坏 CCR5 的多系后代。接受未处理细胞和 CCR5 病毒攻击的对照
组小鼠表现出严重的 CD4+T 细胞丢失，而用 ZFN 修饰细胞移植的小鼠则接受

快速选择 CCR5。Yuan 等还发现在 HIV-1 感染的 NSG 小鼠体内植入 ZFN 修饰
的 CXCR4CD4+T 细胞，对利用 CXCR4 进行组织培养的 HIV-1 具有抵抗力。除
ZFN 外，CRISPR/Cas9 也可有效破坏 HIV-1 感染所需的细胞基因和整合的 HIV-1
前病毒 DNA，表达 Cas9 的重组腺相关病毒 9 个载体和多重 gRNAs 对动物整合

的 HIV-1DNA 的切割有影响，可切除小鼠脾、肝、心、肺、肾和循环淋巴细胞
中大量必需的前病毒 DNA 片段。

五、代谢性疾病基因编辑动物模型

（一）家族性高胆固醇血症基因编辑动物模型
家族性高胆固醇血症（Familial Hypercholesterolemia，FH）是一种造成人体
脂代谢紊乱的遗传性疾病，突变的低密度脂蛋白受体会引发低密度脂蛋白胆固醇

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