Page 39 - 动物生物技术与繁殖研究

第二章 病毒性动物疫病防控

流感 / 新城疫的抗血清做血凝抑制试验，判断是否为禽流感 / 新城疫病毒。然后
利用血凝和血凝抑制试验来鉴定病毒的亚型。病毒分离鉴定的优点是诊断结果较
准确，缺点是费时、费力，需要在具备生物安全设施的实验室利用鸡胚或特定的

细胞进行检测，不能用于快速检测。
（二）免疫学检测方法
1. 血凝和血凝抑制试验
病料可接种 9~11 胚龄的 SPF 鸡胚，收集尿囊液测定其血 HA 活性，若为阴

性，至少盲传 1 代。若为阳性，可进一步采用血凝抑制（HI）试验进行判断。HI
试验也广泛用于鸡群抗体水平的监测，但本方法对技术人员要求较高，且工作量
大，不利于大规模、快速地检测 AIV。
2. 琼脂扩散试验

琼脂扩散试验（Agar-gel Precipitation，AGP）操作简单，结果易于判定，但
抗体检测需 48~72h，且灵敏度较差，容易出现假阴性。彭大鹏等在对 H5、H7、
H9 亚型 AIV 标准阳性血清效价检测中发现，HI 的敏感度是 AGP 的 128 倍。赵
增连等建立的快速定型双扩散法可提高灵敏度，但是 AGP 在大批量样品的快速

检测中仍然不具备优势。
3. 酶联免疫吸附试验
酶联免疫吸附试验（ELISA）结合了抗原抗体反应的特异性和酶催化反应的
高效性，有较高的准确性和敏感度，广泛用于 AIV 的监测。目前有多种 ELISA

技术可应用于 AIV 的检测，如间接 ELISA。仉薇等建立了 H9 亚型 AIV 抗体间
接 ELISA 方法，对 200 份临床血清样本的检测结果与 HI 符合率达 97%，且存
在较高的相关性（R2=0.9811）。为了进一步提高 ELISA 的检测效率，Kodihallis
等建立了双抗夹心 ELISA（DAS-ELISA），以核蛋白（NP）单克隆抗体包被

ELISA 板检测 AIV 抗原，与病毒分离相比，DAS-ELISA 速度快，但是准确性稍
差（阳性样本和病毒分离法一致性为 76.1%，阴性样本为 82.1%）。黄璐等优化
了 H5 亚型 AIVDAS-ELISA 检测方法，进一步减少了检测时间，并将灵敏度提
高 4 倍。虽然 ELISA 技术不断发展，但仍需依赖酶标仪等进行检测分析，针对

这一劣势，Hawkes 等建立了斑点 ELISA（Dot-ELISA），以硝酸纤维膜（NC 膜）
替代 ELISA 板，无需借助分析仪器，阳性结果在膜上出现肉眼可见的着色斑点，
且 NC 膜对蛋白质的吸附性能更好、敏感性更高。焦显芹等对 63 份临床样本进

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