Page 40 - 动物生物技术与繁殖研究

动物生物技术与繁殖研究
Research on Animal Biotechnology and Reproduction

行 Dot-ELISA 检测，重复符合率达 93.9%。为了追求更高的特异性，Chen 等利
用 H6N1AIV 单克隆抗体开发了一种用于检测 H6 亚型的抗原捕捉酶联免疫吸附
试验（AC-ELISA），采用一种单克隆抗体包被 ELISA 板作为捕获抗体，另一种

单克隆抗体用辣根过氧化物酶标记后用作检测抗体，可特异性检测 H6N1AIV。
宋建领等建立的 H9 亚型特异性抗原捕捉 ELISA 方法在对 8423 份野外样品检测
中发现，与病毒分离有 96.5% 的符合率。
此外，也有研究者将 ELISA 和 PCR 进行结合，通过普通 PCR 扩增，以

ELISA 作为最终结果判定手段，建立了灵敏度高、特异性好的 PCR-ELISA 检测
技术。章倩云等以地高辛标记于特异性探针，进行杂交反应，最后显色，该方法
灵敏度更高，是 RT-PCR 技术的 10~100 倍，特异性更强，操作简单，不需要昂
贵的仪器，可用于流感早期诊断。ELISA 检测具有较好的特异性和标准化的操作

流程，但其易受抗体、操作等影响，检测时间长，可满足 AIV 的实验室检测，
但不适合现场快速检测。
4. 胶体金免疫层析技术
胶体金免疫层析技术（Colloidal Gold Immunochromatography Assay，GICA）

又称为侧向免疫层析，是最常用的免疫层析技术之一，待测样品在 NC 膜的毛细
作用下，平行于膜定向移动，抗原抗体在对应处发生特异性结合，借助胶体金颗
粒的显色作用，实现对结果的判读。
胶体金免疫层析技术是一种以胶体金为示踪标志物检测特定抗原或抗体的一

种新型的固相免疫标记检测技术。它的原理是以硝酸纤维素膜（NC）作为固相
载体，将标记了胶体金的抗原或抗体固定在硝酸纤维素膜（NC）上。检测时，
在样品垫上加入待测样品，样品通过毛细作用沿层析方向向前移动。当待测样品
中的待测物泳动至胶体金结合垫，与胶体金结合垫上的受体（抗原或抗体）发生

特异性结合而形成免疫复合物，层析过程中免疫复合物被富集或截留在检测线，
短时间内（5~10min），可通过胶体金的颜色反应目测得到试验结果。
胶体金免疫层析技术在诊断技术中能够快速发展的主要原因是其具有以下
特点：

生产成本低。试纸组成结构简单，生产中使用的设备及耗材成本低，相对易
于制造和进行批量生产。
操作简单、快速。胶体金免疫层析技术操作简单，无需专业的仪器设备、专

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